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應(yīng)用范圍：神經(jīng)熒光染料

產(chǎn)品參數(shù) 

外觀：可溶于水的紫色固體 

Abs/Em (in MeOH): 543/- nm, (emission in MeOH is too weak to measure) 

Abs/Em (in membranes) :510/750 nm 

貯存條件：-20℃避光保存 

保質(zhì)期：12 個(gè)月 

分子式：C30H45Br2N3 

分子量：607.51

產(chǎn)品介紹 

神經(jīng)末梢探針是一系列陽離子型苯乙烯基熒光染料，用于跟蹤神經(jīng)肌肉連接或突觸的突觸活動(dòng)。這類染料通常具有親脂性尾部（兩個(gè)碳鏈）和帶陽離子的高親水性頭部。 NerveRed 系列探針是具有三個(gè)雙鍵的染料。

陽離子苯乙烯基染料是通過活性依賴性染色突觸小泡來發(fā)揮功能。染料與細(xì)胞或組織共孵育時(shí)，染料的水相部分沒有熒光，而染料的親脂性尾部插入細(xì)胞膜并呈現(xiàn)強(qiáng)熒光。神經(jīng)刺激后，在進(jìn)行胞吞作用時(shí)，染料被包裹在囊泡內(nèi)，因此，洗去細(xì)胞表面附著的染料后，熒光信號強(qiáng)弱表示新形成 的囊泡的數(shù)量的多少。反之，在胞吐作用時(shí)，染料與神經(jīng)遞質(zhì)一起從囊泡釋放，導(dǎo)致熒光信號減少。因此，熒光強(qiáng)度的變化反映了胞吞/胞吐或突觸活動(dòng)的情況。內(nèi)吞過程中熒光增加的速率——“結(jié)合速率”和胞吐過程中熒光減少的速率 ——“解離速率”因染料種類而異。通常，具有較長親脂性尾部和更多雙鍵的染料對膜具有較高的親和力，因此具有較高的結(jié)合速率和較低的解離速率。

NerveRed C2 染料不能用于固定細(xì)胞染色，固定細(xì)胞的染色可選擇 NM 系列染料。

實(shí)驗(yàn)操作 

以下是蓋玻片上培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞的神經(jīng)末梢染色方案。

神經(jīng)末梢染料也可用于標(biāo)記非神經(jīng)元細(xì)胞類型的內(nèi)吞囊泡。染色可以在 4℃進(jìn)行以選擇性標(biāo)記質(zhì)膜; 在室溫或 37℃下，染料的內(nèi)吞通常在 10 min 內(nèi)發(fā)生。可以使用 Tyrode 溶液或其它緩沖液，可選擇性添加鈉離子通道阻斷劑河豚毒 素（TTX），其目的是阻斷動(dòng)作電位，防止染色后的突觸囊泡釋放。用于特定實(shí)驗(yàn)的最佳方案需要由實(shí)驗(yàn)者摸索。

1. 在 50 mM Tyrode 溶液中稀釋神經(jīng)末梢染料至最終濃度為 4 μM。在室溫下將含有細(xì)胞的蓋玻片置于該溶液中 1 min，使細(xì)胞完全浸沒。 

2. 將蓋玻片轉(zhuǎn)移至 Tyrode + 0.5 μM 河豚毒素（TTX）溶液中，室溫下孵育 1 min。 

3. 室溫下，用 Tyrode + 0.5 μM TTX 溶液反復(fù)多次洗滌蓋玻片。 

4. 熒光顯微鏡下拍照觀察。

圖. FM4-64 在脂質(zhì)體中的吸收和發(fā)射光譜。