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應(yīng)用范圍：細(xì)胞膜熒光染料、神經(jīng)元順行和逆行示蹤、細(xì)胞長(zhǎng)期示蹤

產(chǎn)品參數(shù) 

● NeuroDiO (C-4048) Ex/Em: 484/501 nm 

● DiI (C-4049) Ex/Em: 549/565 nm 

● DiD (C-4050)Ex/Em: 644/665 nm

圖. CytoMBrite Green, Orange , Red 的吸收光譜和發(fā)射光譜

貯存條件 4℃ 避光保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月。

產(chǎn)品介紹 

DiI, DiO 和 DiD 是一類親脂性碳菁類染料，能夠有效、穩(wěn)定地標(biāo)記質(zhì)膜及細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)構(gòu)。它們具有細(xì)胞毒性低且不 會(huì)在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移的特性，常被作為細(xì)胞融合、粘附、遷移的 示蹤分子，與 PKH 類染料相比，CytoMBrite 染料使用方便、著色均勻。DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）和其它細(xì)胞膜熒光染料如 DiR（近紅外熒光）、NIR680 （遠(yuǎn)紅外染料）配合使用，為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。

CytoMBrite 系列染料也可以用于甲醛固定后細(xì)胞的染色，同時(shí)兼容在染色后的甲醛固定步驟。此系列染料不適用于細(xì)菌或酵母。

使用方法 

工作液使用體積建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦量的 10 倍范圍內(nèi)開(kāi)始最優(yōu)條件的摸索。

1. 懸浮細(xì)胞染色 

（1）加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，使其密度為 1×106/mL，再按 1:200 的比例加入染色原液。 

（2）37℃孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系。 

（3）1000～1500 rpm 離心 5 min。傾倒上清液，再次緩慢 加入 37 ℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重復(fù)兩次。

2. 貼壁細(xì)胞的染色 

（1）配制染色工作液：每 1 mL 培養(yǎng)基中加入 5 μL 的染色原液，渦旋混勻。 

（2）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上，培養(yǎng)結(jié)束后移出蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，但表面要保持濕潤(rùn)。 

（3）在蓋玻片的一角加入 100 μL 的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。 

（4）37℃孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系。 

（5）吸干染料工作液，用預(yù)溫的培養(yǎng)基洗蓋玻片 2～3 次， 每次 5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。注意保持表面濕潤(rùn)。

3. 結(jié)果檢測(cè) 制備好的樣品可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

注意事項(xiàng) 

1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。