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1 化學(xué)和物理性質(zhì)

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。親水基質(zhì)使其非特異性吸附最小化，并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。 

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過(guò)程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級(jí)也可用于批量工藝。

2 產(chǎn)品說(shuō)明

使用方法 

Sephadex 系列產(chǎn)品以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應(yīng)避免過(guò)度攪拌，因?yàn)樗赡芷茐奶盍?，不要使用磁力攪拌器?/span>

3.1 填料的準(zhǔn)備 

（1）將填料在過(guò)量去離子水或緩沖液中，室溫條件下膨脹 3 小時(shí)，或用熱水膨脹 1 小時(shí)。洗脫緩沖 液不應(yīng)含有高粘度的試劑。溶脹過(guò)程中，如果上層有碎膠，請(qǐng)去除。 

（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實(shí)驗(yàn)操作溫度。

3.2 裝柱 

（1）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

（2）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

（3）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠 在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。 

（4）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過(guò)填 料最大耐壓）。

3.3 平衡

上樣前平衡層析柱至少 5-10 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的 PH 值和等電點(diǎn)等于上 柱的 Buffer 的 PH 值和等電點(diǎn)）。 

3.4 上樣

樣品一定要離心或過(guò)濾后（0.45um）上樣。 凝膠過(guò)濾的上樣量一般為不大于 5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在 1-2%的柱床體積，視分離 情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到 20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高過(guò)高的凝膠 層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為 5：1 即 可。 

3.5 洗脫方法 

可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱 Buffer 中加入 NaCl 等梯度洗脫或鹽梯度洗 脫也可以完全分離純化。

3.6 在位清洗（CIP） 

凝膠使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以 40cm/h 用 0.1 M 氫氧化鈉洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

4 保存 

使用完的填料，用純水將鹽分徹底沖洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。

注意事項(xiàng)： 

1.上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。 

2.在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.15 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。 

3.不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。