Phos-tag? Biotin
無特異性磷酸化抗體時(shí)的理想選擇!
Phos-tag? Biotin 是與生物素結(jié)合的 Phos-tag?,可用于免疫印跡法檢測(cè)磷酸化蛋白。Phos-tag? Biotin BTL-104 和 BTL-105 可靈敏檢測(cè) PVDF 膜上的磷酸化蛋白。
◆原理
◆優(yōu)點(diǎn)、特色
● 無輻射。
● 無需 PVDF 膜的封閉處理。
● Phos-tag? 的特異性結(jié)合與氨基酸種類、序列無關(guān)。
● 可適用于免疫印跡和質(zhì)譜分析等后續(xù)工作。
● Phos-tag? BTL 母液可穩(wěn)定保存至少6個(gè)月。
● 實(shí)驗(yàn)流程與使用 HRP 標(biāo)記抗體相類似。
※BTL-104、BTL-105、BTL-111 三者連接鏈(Linker)長(zhǎng)度不一,但使用上基本相同。BTL-111 靈敏度更高。
◆案例、應(yīng)用
【使用例:在 PVDF 膜上檢測(cè)磷酸化蛋白】
轉(zhuǎn)印在 PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精確檢測(cè)到 ng 級(jí)水平,沒有檢測(cè)到相應(yīng)的去磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的信號(hào)斑點(diǎn)。
免疫印跡檢測(cè)磷酸化蛋白——Phos-tag ? 生物素。
摘自 Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749
【使用例:Phos-tag? 生物素在檢測(cè)蛋白激酶活性的微陣列(生物芯片)中的運(yùn)用】
蛋白激酶是很多疾病診斷和藥物篩選的靶標(biāo)。近來有科研人員研發(fā)了一種檢測(cè)胞內(nèi)蛋白激酶活性的高靈敏度多肽微陣列。用微陣列點(diǎn)樣機(jī)點(diǎn)樣 2 nL 體積的底物多肽溶液,使多肽固定在戊二醛預(yù)修飾的高氨基末端載玻片。
當(dāng)多肽經(jīng)細(xì)胞裂解液磷酸化后,用熒光標(biāo)記的抗 phosphotyrosine(磷酸化酪氨酸)抗體檢測(cè)酪氨酸激酶,或者用 Phos-tag? 生物素,接著用熒光標(biāo)記的親和素檢測(cè)絲氨酸或者蘇氨酸激酶。之后用自動(dòng)微陣列掃描儀檢測(cè)熒光信號(hào)。多肽微陣列系統(tǒng)包括簡(jiǎn)單的多肽固定,只需少量樣品,具有高密度陣列。重要的是,檢測(cè)細(xì)胞裂解液蛋白激酶活性的靈敏度高。
因此多肽微陣列系統(tǒng)可用于高通量篩選細(xì)胞內(nèi)激酶活性,可用于藥物篩選和疾病診斷。
產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級(jí) | 備注 |
301-93531 | Phos-tag? Biotin BTL-104 Phos-tag 生物素 | 10 mg | - | - |
308-97201 | Phos-tag? Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution Phos-tag 生物素1mM水溶液 | 0.1 mL | - | - |
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